Località: Rozzano, IT, 20089 **Job title**: PNRR - Post Doc** Nell’ambito del _Piano Nazionale di Ripresa e Resilienza (PNRR)_, l’IRCCS Istituto Clinico Humanitas ha avvitato le procedure di selezione pubblica per il reclutamento nell’ambito dei progetti di **Valorizzazione e potenziamento della ricerca biomedica del SSN**. **RIFERIMENTO COMMESSA E CUP**:
**Numero progetto**:PNRR-MCNT2-2023-12378017 **CUP**: E27G24000030006 **TITOLO E BREVE DESCRIZIONE DEL PROGETTO**:
**Utilizzo della tecnologia degli oligonucleotidi modulatori dello splicing per manipolare gli eventi di splicing alternativo aberrante nella terapia della sclerosi multipla** (Exploiting the Splice-Switching Oligonucleotides technology to modulate aberrant alternative splicing events in multiple sclerosis therapy) Lo splicing alternativo (AS) è un meccanismo post-trascrizionale che porta alla produzione di mRNA diversi a partire da singoli geni. Una deregolazione del meccanismo di splicing alternativo è stata implicata in molte malattie, tra cui la sclerosi multipla (SM), una malattia autoimmune cronica del sistema nervoso centrale caratterizzata da linfociti T autoreattivi. Sebbene la deregolazione dello splicing alternativo sia stata dimostrata nella SM, non sono ancora state sviluppate strategie terapeutiche mirate a questo meccanismo alterato. Il ripristino dell'equilibrio tra le isoforme deregolate dello splicing potrebbe rappresentare una strategia terapeutica innovativa nelle cellule immunocompetenti. In questo contesto, il progetto si propone di:



- esplorare il profilo dello splicing alternativo nei linfociti T sia di pazienti affetti da SM sia di controlli per evidenziare gli eventi di splicing alternativo deregolati;
- modulare significativamente gli eventi di splicing alternativo fortemente deregolati nei linfociti T utilizzando oligonucleotidi antisenso per lo switch dello splicing;
- valutare la potenziale patogenicità degli eventi di splicing alternativo identificati in termini di traduzione di potenziali neoepitopi. **Profilo qualificato e breve descrizione delle attività richieste**:
**Ruolo**: Post Doc **Attività**: - **Profilazione dello splicing alternativo**: - **Isolamento di RNA**: Isolamento di RNA di alta qualità da linfociti T di pazienti con SM e controlli sani.
- **Sequenziamento RNA-seq**: Esecuzione di esperimenti di sequenziamento RNA-seq ad alta profondità per identificare gli eventi di splicing alternativo differenzialmente espressi nei due gruppi.
- **Validazione degli eventi di splicing**: - **PCR quantitativa (qPCR)**: Validazione degli eventi di splicing identificati tramite RNA-seq utilizzando qPCR.
- **Western blotting**: Analisi dell'espressione delle isoforme proteiche derivanti dagli eventi di splicing alternativi.
- **Modulazione dello splicing alternativo**: - **Design di oligonucleotidi antisenso**:



Progettazione di oligonucleotidi antisenso specifici per modulare gli eventi di splicing alternativi di interesse.
- **Trasfezione di linfociti T**: isolamento di linfociti T da pazienti con SM e controlli sani. Trasfezione di linfociti T con gli oligonucleotidi antisenso e valutazione dell'efficacia di modulazione dello splicing.
- **Valutazione della patogenicità**: - **Saggi immunoenzimatici (ELISA)**: Valutazione della reattività degli anticorpi contro i potenziali neoepitopi nei pazienti con SM. **Titoli di Studio richiesti**: Dottorato di ricerca in ambito di biologia cellulare, biologia molecolare e/o genetica **Competenze tecniche**: - Solida esperienza in **tecniche di biologia molecolare e cellulare**, tra cui isolamento di RNA, qPCR, Western blotting, trasfezione cellulare, sequenziamento Sanger, microscopia.
- Ottima conoscenza delle **metodiche di preparazione delle libraries per sequeziamento di RNA** (RNA-seq bulk, e single cell sequencing).
- Esperienza nella **progettazione e utilizzo di oligonucleotidi antisenso**.
- Capacità di lavorare in modo **indipendente**e in** team**.
- **Ottime capacità comunicative** sia scritte che orali, per presentare i risultati della ricerca.
- Solida esperienza pluriennale nel ruolo di ricercatore/a in biologia molecolare e cellulare;
- Comprovata capacità di progettazione e conduzione di esperimenti di biologia molecolare;
- Conoscenza approfondita della lingua inglese.
- Le persone interessate sono invitate a leggere l'informativa privacy ex artt. 13 e 14 del Reg. UE 2016/679._ **Data pubblicazione avviso: 11 / 12 / 2024** **Data di inserimento prevista: 31 / 12 / 2024

📌 Pnrr - Post Doc (Rozzano)
🏢 Humanitas
📍 Rozzano